Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО | Материнство — беременность, роды, питание, воспитание

Почему возникают мутации?

Мутации – не такое редкое явление, как многие считают. Около 70% эмбрионов не реализуются в беременность именно по причине генетических дефектов. Чаще всего после оплодотворения такая яйцеклетка погибает до имплантации. То есть, она не встраивается в стенку матки.

Если же это происходит, велик риск самопроизвольного аборта. На определенном этапе плод перестает развиваться. Это обычно происходит в первом триместре, когда закладываются основные органы и ткани. Реже хромосомные мутации оказываются совместимыми с жизнью.

Тогда у пары рождается больной ребенок.

Причины мутаций – это нарушение процесса дозревания яйцеклеток или сперматозоидов. В 85% случаев дефектные гены несут женские клетки, ещё в 15% – мужские. Причина заключается в том, что яйцеклетка – более сложная структура. Поэтому при её производства у организма больше шансов допустить ошибку.

Мутации могут быть спонтанными или наследуемыми. Хромосомные мутации обычно спонтанные. По наследству они передаются очень редко. А вот генные – наоборот, чаще наследуются. Таких заболеваний существует огромное количество. Проверить эмбрион на их все невозможно.

Что лучше для переноса – морула или бластоциста?

Единого мнения о том, делать подсадку эмбриона на стадии компактизации или бластоцисты, нет. Оптимальный срок подбирается индивидуально. Морула на 4 сутки – наиболее физиологичный вариант. На этой стадии эмбрион проникает в матку при естественном наступлении беременности. Но оценить качество морулы не всегда возможно из-за сглаженного вида клеток.

До 5 суток в искусственных условиях выживают наиболее сильные эмбрионы. Подсадка на этой стадии дает результат в 2 раза лучше, чем при пересадке 3-дневных зародышей. Но до состояния бластоцисты доживают немногие.

Репродуктологи руководствуются количеством и качеством эмбрионов на 2-3 сутки. Если их 3-4 и более, то есть возможность подрастить до состояния бластоцисты и выбрать более качественных. При наличии 2-3 морул подсадку делают на 3 сутки. Даже при среднем качестве зародышей условия материнского организма более благоприятные, чем искусственные питательные среды.

Юлия Шевченко, акушер-гинеколог, специально для Mirmam.pro 

Пгд эмбриона при эко – что это такое?

Использование ПГД стало возможным только после того, как была разработана полимеразная цепная реакция, позволяющая анализировать структуру ДНК. Кроме того, проведение этой дополнительной вспомогательной репродуктивной технологии невозможно без ЭКО.

Поэтому впервые ПГД была использована в 1989 году. Был проведен анализ бластомера (клетки) эмбриона, пребывающего на стадии дробления. Он состоял из 6-8 одинаковых клеток. Процедура была выполнена успешно. У супружеской пары, имевшей повышенный риск Х-сцепленного заболевания, в 1990 году родился здоровый ребенок.

В 1992 году впервые была проведена ПГД моногенного заболевания (муковисцидоз). Некачественный эмбрион был отбракован. Женщине перенесли эмбрион без генетических заболеваний и мутаций, и у неё родился здоровый ребенок.

В 2020 году для диагностики хромосомных аномалий начал широко применяться метод FISH. С этого момента метод сравнительной гибридизации стал вытесняться из медицинской практики.

Что такое качество ооцита

Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.

Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре. 

4-е сутки эмбрионального развития

На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией.

Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов  ооцита.

Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.

На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.

Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.

Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:

  • А – эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко.
  • В – компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
  • С – частичная компактизация (около 50% бластомеров).
  • D – компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры. 

Морулы отличного качества

Морула плохого качества

Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.

 Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты).

Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка.

На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы. 

Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы.

Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6.

Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы.

Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.

Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность. 

Бластоцисты хорошего качества

3АА

4АА

5АА

5АА

6АА

Бластоцисты среднего качества

1АВ

 2ВВ

Бластоцисты плохого качества

2ВС

3ВС

  2СС

День второй

На второй день культивации клетка делится на две. Образуются бластомеры.

Бластоме?ры — клетки эмбрионов на этапе дробления. Оплодотворенная яйцеклетка  делится на две дочерние клетки, называемые бластомерами. Каждый бластомер делится на две новые дочерние клетки, которые также получают название бластомеров.

Критериями качества эмбриона на данном этапе  являются его:

  • размеры;
  • форма;
  • степень фрагментации (объем, который внутри эмбриона занимают безъядерные элементы цитоплазмы);

Чем больше внутри эмбриона бластомеров и чем меньше степень фрагментации, тем более качественным он считается. Такой зародыш имеет большой потенциал к дальнейшему нормальному развитию.

Многие эмбриологи используют классификацию, отражающую качество эмбрионов с помощью четырех букв латинского алфавита. Вот эта классификация:

  • А – безъядерных фрагментов нет, высококачественный эмбрион;
  • В – фрагментация до 20%, эмбрион среднего качества;
  • С – содержание безъядерных элементов цитоплазмы больше 20%, но не достигает 50%, эмбрион удовлетворительного качества;
  • D – количество ануклеарных (безъядерных) фрагментов цитоплазмы превышает 50%, такой эмбрион считается некачественным.

Также в этой классификации используются цифры, которые отражают количество бластомеров. Чем их больше, тем продукт слияния мужской и женской половых клеток считается лучше. Например, эмбрион «4В» оценивается более высоко, чем «3С». Ведь в нем больше бластомеров и меньше фрагментация.

День первый

Сразу после оплодотворения доктор проверяет признаки того, что процедура ИКСИ, ПИКСИ или ЭКО проходит успешно. Для этого он смотрит, как выглядят пронуклеусы, и оценивает их:

  • наличие;
  • количество;
  • внутреннюю структуру;
  • симметричность;
  • внешний вид.

Пронуклеусы – это ядра половых клеток (мужских и женских), которые еще не слились. Изучая их вид, можно оценивать перспективы, качество и жизнедеятельность будущих эмбрионов.

Критерии нормы:

  • пронуклеусов должно быть два;
  • они должны располагаться рядом;
  • их размеры должны быть одинаковыми;
  • внутри должны визуализироваться «ядрышки» (пронуклеоли);
  • «ядрышки» должны иметь правильное расположение и количество.

На данном этапе развития эмбрионов может формироваться множество патологий, которые ведут к их гибели. Например:

  • присутствие одного пронуклеуса вместо двух (оплодотворение не состоится);
  • наличие трех пронуклеусов (эмбрион нежизнеспособен, так как будет иметь тройной хромосомный набор).

Плохие эмбрионы сразу отбраковывают. Нет смысла их пересаживать. Даже если они не погибают на этапе культивации, организм женщины сам отторгает такие зародыши. В результате если беременность наступает, она очень быстро прерывается. Это происходит уже в первые недели гестации.

Гестация, гестационный возраст новорожденного (от лат. gestatio ношение) — количество полных недель беременности, прошедших между первыми сутками последней менструации роженицы и моментом перерезания пуповины во время родов.

День третий

Нормальный эмбрион на третий день развития имеет от 7 до 9 бластомеров. Он уже начинает выполнять заложенную в нем генетическую программу.

На данном этапе многие зародыши прекращают свое развитие. Это происходит по причине наличия дефектов генетического материала.

«Блок развития» – так называют эмбриологи явление, которое обеспечивает естественный отбор. Процесс размножения весьма сложен. В ДНК часто случаются поломки. «Поломанные» эмбрионы останавливаются в развитии.

Оценка их качества происходит точно так же, как на второй день. Используется аналогичная классификация. Только бластомеров становится больше. Поэтому описываются они, например, как 8А.

Диагностика каких заболеваний проводится?

С помощью ПГД проводится диагностика огромного количества различных заболеваний. Это хромосомные или моногенные патологии. Диагностика проводится как эмпирически, так и целенаправленно.

Эмпирическая диагностика используется в случаях, когда у родителей или их родственников не обнаружены какие-либо наследственные заболевания. Тогда эмбриологи ищут те болезни, что чаще всего встречаются.

В иных случаях путем генетического консультирования врачи устанавливают, что родители могут быть носителями генов:

  • муковисцидоза;
  • гемофилии;
  • фенилкетонурии;
  • тугоухости;
  • серповидно-клеточной анемии;
  • миодистрофии Дюшенна;
  • болезни Гоше и т.д.

Количество генных заболеваний, на которые проводится обследование эмбриона, исчисляется сотнями.

Все пары исследуют на хромосомные аномалии. Это могут быть лишние или недостающие хромосомы, изменение их положения, обмен фрагментами генетического материала, отсутствие частей хромосом и т.д.

Наиболее частые патологии – это синдромы Патау, Дауна, Эдвардса, кошачьего крика, Клайнфельтера, Шерешевского-Тернера, Прадера-Вилли.

Как улучшить качество эмбрионов при эко

Чтобы улучшить качество яйцеклеток перед эко следует исключить основные факторы, ведущие к ухудшению их качества. К ним относится:

  • Генетический материал, унаследующий как от женщины так и от мужчины
  • Проживание в местности с неблагоприятной экоситуацией, что ухудшает качество как яйцеклеток так и сперматозоидов
  • Наличие вредных привычек у людей, желающих стать родителями. К ним в первую очередь относится никотинзависимость, алкоголизм, наркомания
  • Избыточная масса тела пары
  • Неполноценная диета с исключением жиров – вегетарианство, также снижает качество яйцеклеток и тем самым уменьшает вероятность наступления беременности.
  • Постоянное воздействие эмоциональных потрясений и стрессов
  • Гормонотерапия также своего рода уменьшает активность яйцеклеток.

В зависимости от того, какой класс эмбрионов при эко не существует единой методики определения качества бластоцисты. В большинстве случаев учитывают количество клеток, которые делятся, их распорядок, процент фрагментации, а также толщину оболочки бластоцисты.

Впервые после пункции ооцитов и извлечения яйцеклеток через 48 часов оценивают их качество, при этом количество делящихся клеток не менее двух, а еще через сутки должно быть не меньше 6 клеток, которые располагаются упорядочено и без участков фрагментации.

Все эти параметры оценивает только врач – лаборант репродуктивной клиники, который указывает на вероятность успешной имплантации и сроки ее проведения.

Общепринятым принято считать, что наибольшую способность к имплантации имеют эмбрионы с большой скоростью деления, бластомеры которых имеют определенную форму и фрагментация в них не наблюдается.

Согласно категории эмбрионов при эко проводится подсадка только эмбрионов, способность которых врач оценивает при культивации. В результате этого увеличивается вероятность выбора для подсадки при оплодотворении самых лучших и качественных клеток, при этом ЭКО-лаборант оценивает какая степень зрелости бластоцисты, ее внутриклеточное содержимое и толщину наружной оболочки.

В итоге каждый эмбрион получает оценку и чем она выше, тем шансы на имплантацию больше и успех экстракорпорального оплодотворения более вероятный, чем при низкой оценке. Для репродуктолога очень важны цифры и буквы, которые поставил врач-лаборант Вашей бластоцисте.

Что же означают цифры знает каждый репродуктолог.

Если 1 – то бластоциста незрелая и полость ее составляет половину объема, 2 – бластоциста соответствует дробящемуся эмбриону, 3 – размеры бластоцисты значительно больше эмбриона и имеет большую полость, 4 – вся бластоциста состоит из полости и она начинает пробиваться сквозь плотную оболочку, 5оболочка продолжает разрываться и 6 – когда бластоциста уже оболочки не имеет.

Еще врач даст букву, которая указывает на содержимое клетки из которой и будет происходить формирование ребенка. Если у Вас буква А, то это указывает на качественное содержимое клетки, зародыш имеет много клеток. В – свидетельствует об относительно качественном содержимым клетки и имеет небольшие отклонения.

С свидетельствует о наличии серьезных изменений и нарушений, происходящих в клетке. А буква D указывает на очень плохое качество клетки, при которой наступление беременности невозможно. Такое может случится если ЭКО и уреаплазма пресутствуэт в организме.

Если у Вашей пары имеются проблемы с зачатием ребенка, в частности с качеством яйцеклетки или сперматозоида, то в таком случае единственным шансом на приобретение своего ребенка будет проведение методики экстракорпорального оплодотворения.

Во всех регионах России для жителей страны, имеющих полис ОМС, предусмотрена бесплатная программа проведения ЭКО.

Для участия в ней достаточно пройти регистрацию на нашем сайте, подать заявку на проведение бесплатной процедуры и тогда, после дополнительных обследований и сбора пакета документов Вы получите квоту на ее проведение и появится шанс стать родителями.

Какие методы используются?

В настоящее время существует 3 основных методики ПГД:

  • ПЦР. Проводится только для выявления генетических заболеваний или отбора резус-совместимых эмбрионов. Позволяет анализировать последовательность нуклеотидов в структуре ДНК. Выявляет гены, ответственные за определенные заболевания.
  • Сравнительная геномная гибридизация. Используется для выявления хромосомных аномалий. На микрочипе генетический материал клеток сравнивается с эталоном.
  • FISH-диагностика. Одна из новых методик, занимающая минимум времени. Используется как альтернатива сравнительной геномной гибридизации. Применяются специальные ДНК-зонды, помеченные красителем и гибридизирующиеся с хромосомной ДНК. Затем при микроскопии определяются подсвеченные участки.

Результаты процедуры:

  • шанс наступления беременности увеличивается в среднем на 10%;
  • вероятность самопроизвольного аборта уменьшается в 2 раза;
  • риск многоплодной беременности снижается в 2 раза;
  • вероятность осложнений во время родов уменьшается на 20%;
  • практически исключается риск хромосомных мутаций или генетических заболеваний (по крайней мере тех, на которые исследуют эмбрион в процессе ПГД).

Какие преимущества даёт пгд?

При ЭКО обычно проводится оплодотворение 3-4 яйцеклеток, и затем они исследуются. Для имплантации выбирается та, которая после оплодотворения не содержит каких-либо генетических и хромосомных отклонений.

Вот основные преимущества, которые дает ПГД при ЭКО будущим родителям:

Эта процедура очень точная. Вероятность, что эмбрион с мутациями будет ошибочно классифицирован как здоровый, составляет в среднем 3,5%.

При этом недостатков ПГД практически не имеет. На стадии бластоцисты эмбрион состоит из одинаковых клеток. Поэтому взятие одной из них для проведения анализа никак не повлияет на дальнейшее развитие плода. Риск случайного повреждения эмбриона во время биопсии не превышает 0,5%, а в хорошей клинике с высококвалифицированными эмбриологами он близок к нулю.

ПГД при ЭКО получил разноречивые отзывы, и в целом эта методика дает возможность проводить качественную профилактику генетических и хромосомных заболеваний у будущего ребенка.

Классификация эмбрионов по качеству эко

Оценка качества эмбрионов при эко осуществляется по нескольким показателям. Среди них выделяют основные – это:

  • внешний вид эмбриона соответственной правильной формы, ровный и симметричный, а его оболочка не имеет видимых утолщений и деформаций.
  • в зависимости от того, когда проводится анализ эмбриона – на какие сутки после оплодотворения оценивается количество делящихся клеток и в зависимости от количества клеток репродуктологи судят о правильном или нет развитии эмбриона
  • степень фрагментации бластомеров. Принято считать, что до 25% фрагментации – норма, так как такие мелкие фрагменты могут участвовать в дальнейшем на созревание бластоцисты, но если их количество превышает этот процент, то их не выбрасывают, а культивируют до 6х суток, так как шанс у них еще есть на образование полноценного эмбриона.
  • размер клетки должен быть правильной формы и все клетки должны быть равными по объему.
  • При появлении каких–либо включений в цитоплазму свидетельствует о неблагоприятном исходе наступления беременности
  • деление должно проходить в одно и то же время и равномерно, то есть, если между появлением третей и четвертой клеток был короткий промежуток времени, то это указывает на то, что бластомеры на уровне первых двух клеток поделились равномерно.

Классификация эмбрионов при эко делится на подсадку трехдневок и пятидневок. Согласно классификации трехдневных эмбрионов для их имплантации используют только эмбрионы отличного и хорошего качества.

Существует определенная маркировка, состоящая из набора цифр и букв, где буквы указывают на процент фрагментации, а цифры свидетельствуют о количестве клеток эмбриона на данном этапе развития.

Итак, давайте рассмотрим, а как же проходит оценка эмбрионов при эко в зависимости от процента фрагментации. Итак:

  • A. В эту группу входят «отличники» так называют эмбрионов отличного качества, так как у них скорость деления клеток высокая, форма бластомеров сферическая, что способствует максимальным шансам имплантации эмбриона в эндометрий.
  • B. «Хорошисты» это эмбриона хорошего качества, при этом форма бластомеров неровная, фрагментация незначительная, но имплантация имеет высокую вероятность наступления.
  • C. Эмбрионы качества С характеризуются фрагментацией от 20 до 53%, что существенно снижает способность к имплантации.
  • D. Эмбрионы плохого качества относят к группе Д, так как процент фрагментации составляет больше 52% и их отбраковывают, так как шансы на имплантацию равны практически нулю.

Если подсадки эмбрионов у пары еще есть эмбрионы из группы А или В, то есть возможность их заморозить, так как в случае неудачной попытки ЭКО будет возможность проведения еще одного оплодотворения без гиперстимуляции яичников.

Существует также классификация бластоцист при эко, когда используют пятидневные эмбрионы. Эмбрионы оцениваются по качеству бластоцисты и ее внутриклеточного содержимого, а также по качеству трофоэктодермального листка.

Классы эмбрионов в эко на стадии развития бластоцисты обозначаются набором цифр и букв. Давайте попробуем в них разобраться.

Итак, в зависимости от размера эмбриона на стадии бластоцисты проводят оценку качества эмбрионов, где 1 – это появление ранней бластоцисты, 2 средняя бластоциста, 3 – растущая , 4 – с начавшимся разрушением наружной оболочки, 5 – бластоциста в хетчинге и 6 – это вышедшая из своей оболочки бластоциста самостоятельно.

При оценке эмбрионов учитывают отсутствие видимых дефектов и плотность оболочки бластоцисты, где А – это эмбрион самый качественный с плотной оболочкой, а Д – дефектный эмбрион, который отбраковывается.

Существует еще одна классификация эмбрионов по качеству эко, которая основана на содержании внутриклеточной массы и трофоэктодермы.

А класс характеризуется в плотно упакованной, без дополнительных образований и хорошо определяемой внутриклеточной массой и однослойеая многоклеточная трофоэктодерма.

В класс характеризуется наличием таких дефектов, как включения, плохо упакованным и плохо визуализируемым содержимым внутри клетки, а трофоэктодерма неравномерная и содержит несколько слоев.

С класс, в отличии от предыдущих, внутриклеточная масса не видна или имеет сильные дефекты в своей структуре, при этом трофоэктодерма содержит много включений и вакуолей.

И наконец D класс – он содержит дегенеративную массу внутри клетки и такой же трофоэктобласт.

Классификация эмбрионов при эко

  1. Причины
  2. Оценка качества эмбрионов
  3. Как улучшить качество яйцеклеток

Качество эмбрионов при эко зависит от того, какое качество яйцеклеток при эко получено и какого качества сперматозоиды.

Среди факторов, влияющих на качество эмбрионов при эко следует выделить такие, как:

  • неблагоприятное воздействие экологических факторов значительно ухудшает их качество и тем самым снижает риски возникновения беременности
  • Действие токсических веществ при курении, употреблении алкоголя, от бытовой химии, некоторых лекарственных препаратов, паров бензина и другие также снижают способность эмбриона к имплантации
  • Гормонально зависимые заболевания женской репродуктивной системы также могут значительно снижать качество эмбрионов
  • Плохой иммунитет и слабый иммунный ответ на действие повреждающих факторов
  • постоянное воздействие стресса и синдром хронической усталости
  • Ожирение также способствует плохому качеству эмбрионов, так как при нем происходит нарушение гормонального баланса в организме
  • Неполноценное питание, ограничение качества приема пищи ведет к аминокислотному недостатоку, дефициту витаминов и минералов, что свидетельствует также о плохом их качестве
  • Воздействие радиации на организм также ведет к патологическому развитию эмбрионов, потому что при ее воздействии нарушается процесс деления клеток
  • Воздействие постоянной смены климата и временной ленты ведет к стрессу не только всего организма, но и активно делящихся клеток в нем – например, бластоцисты.

Плохое качество яйцеклеток при эко чаще всего наблюдается, если получено много ооцитов после гиперстимуляции яичников, что связано прежде всего с воздействием вышеописанных факторов на организм беременной женщины.

Когда проводится генетическая диагностика?

Исследоваться могут разные части женских половых клеток или эмбрионов. Используются три подхода:

  • Исследование полярных телец. Это клеточные образования, возникающие при созревании ооцита. Они не играют роли в оплодотворении. Поэтому полярные тельца без ущерба для яйцеклетки могут быть удалены и исследованы. Метод позволяет получить информацию о хромосомном наборе женской гаметы. Но он не гарантирует полноценности генетического материала эмбриона.
  • Исследование бластомера. Клетку эмбриона берут на 3 день его развития. В это время он имеет обычно от 6 до 8 клеток (бластомеров). Исследование позволяет определить большинство мутаций. Но имеет одно слабое место – не может быть определен мозаицизм. Это мутация, при которой разные клетки несут разный генетический материал.
  • Исследование трофэктодермы. Это клетки эмбрионального происхождения, из которых образуется внешняя оболочка эмбриона. Данный способ диагностики проводится на 5 день, когда эмбрион пребывает на стадии бластоцисты. В этом случае ПГД при ЭКО может обнаружить и мозаицизм, потому что исследуются сразу несколько клеток. Но недостатком такой диагностики является необходимость заморозки эмбрионов, потому что анализ проводится от 1 до 3 дней. Таким образом, перенос приходится откладывать на следующий цикл. Впрочем, хотя это оборачивается дополнительными и финансовыми затратами для пары, на вероятность беременности влияние криоконсервации эмбрионов – только положительное. В криоцикле больше шансов забеременеть, чем в «свежем» цикле, потому что врачам удается добиться наилучшей синхронизации состояния эндометрия и стадии развития эмбрионов.

Таким образом, ПГД при ЭКО можно проводить до оплодотворения, на 3 день развития эмбриона, а также на 5 дней. На практике чаще всего используют последний вариант. Потому что на 5 день исследование будет наиболее достоверным и информативным.

Когда риск генетических проблем у ребенка считается высоким?

Процедура ПГД не выполняется всем подряд. Её делают только тем, когда относят в группу. Таких групп две:

  • родители, которые могут передать ребенку наследственную патологию;
  • высокий риск образования анеуплоидных гамет при нормальном кариотипе.

ПГД при ЭКО всегда проводится носителям генных и хромосомных аномалий. Существует очень большая вероятность, что они будут переданы ребенку. Поэтому при проведении ПГД при ЭКО многие эмбрионы будут отбракованы. Их не станут переносить в матку. Соответственно, не родятся дети с генетическими или хромосомными мутациями, которые напрямую наследуются от родителей.

В число заболеваний, при которых делают ПГД эмбриона, входят:

  • моногенные болезни: (аутосомно-рецессивные, аутосомно-доминантные, сцепленные Х‑ или Y половой хромосомой);
  • структурные или числовые аберрации хромосом.

Пациенты с подозрением на мутации в хромосомах подлежат обследованию у генетика. Многие хромосомные патологии обнаруживаются в анализе крови, которые супруги могут сдать в случае повторяющихся неудачных ЭКО или привычных выкидышей.

Однако иногда они в ходе генетической диагностики не выявляются. Бывают случаи механицизма – когда часть клеток у человека имеют хромосомные аберрации, а другие нормальные.

В такой ситуации поможет консультация генетика, исследование материала абортусов или эмбрионов.

Вторая группа пациентов, нуждающихся в предимплантационной генетической диагностике, это люди с высоким риском по образованию анэуплоидных гамет. При этом у них может сохраняться нормальный соматический кариотип. То есть, набор хромосом в неполовых клетках соответствует норме.

Такую генетическую диагностику называют предимплантационным скринингом. В ходе ПГД при ЭКО у всех эмбрионов считают количество хромосом, определяют их структуру. В разных клиниках используются разные диагностические подходы.

Число хромосом, на которые проводят ПГД при ЭКО, может быть различным. Проверяют от 8 до 22 пары. При проведении генетической диагностики на меньшее количество хромосом проверяются те из них, в которых мутации бывают чаще всего.

Если же используется максимальное исследование, оно может стоить дороже, но обнаруживает даже те аберрации, которые наблюдаются реже.

Установлено, что исследование всего 5 пар хромосом в ходе ПГД при ЭКО позволяет обнаружить 40% всех мутаций у эмбрионов, достигших стадии бластоцисты. Оценка состояния 12 хромосом обнаруживает 90% хромосомных перестроек.

В группу высокого риска по анэуплоидиям входят по возрасту, отягощенному анамнезу (неудачные ЭКО, выкидыши) или результатам спермограммы (тяжелые нарушения с выраженной олигоастенотератозооспермией с высокой вероятностью приведут к хромосомным аберрациям у плода).

На генетический скрининг приходится около 60% всех проводимых в мире ПГД при ЭКО. Эта процедура имеет высокую эффективность, так как многие неудачные попытки искусственного оплодотворения и минимум 50% всех выкидышей ранних сроков обусловлены именно хромосомными аберрациями эмбрионов.

Кому требуется пгд?

Ежегодно в России тысячи детей рождаются после ЭКО. Но не всегда во время этой процедуры выполняется преимплантационная генетическая диагностика. ПГД проводится по показаниям. Основные из них:

  • носительство хромосомной аберрации или генетического заболевания у одного или обоих будущих родителей;
  • возраст женщины более 35 лет;
  • возраст мужчины 40 и более лет;
  • тяжелые нарушения сперматогенеза у мужчины;
  • привычное невынашивание беременности (2 и более случая перинатальных потерь в анамнезе);
  • 3 и более неудачных попыток ЭКО;
  • необходимость предотвращения возможного резус-конфликта;
  • отягощенный семейный анамнез (выкидыши, мертворождения, хромосомные мутации и т.д. среди ближайших родственников супругов).

Возраст женщины – один из весомых факторов риска генетических аномалий у ребенка. Поэтому даже при отсутствии в анамнезе перинатальных потерь и неудачных ЭКО, после 35 лет лучше провести ПГД.

По статистике, риск рождения ребенка с хромосомными аберрациями составляет для женщин разного возраста:

  • в 30 лет – 0,26%;
  • в 40 лет – 1,6%;
  • в 45 лет – 5,26%.

Таким образом, в 45 лет одна из 19 беременностей заканчивается выкидышем или рождением больного ребенка по причине хромосомных перестроек. Эти последствия можно предотвратить с помощью ПГД.

На какой стадии развития эмбриона осуществляют перенос?

Выбор срока для подсадки определяется механизмами развития клеток:

  • В первые сутки переноса избегают. На этом этапе сложно оценить качество зародышей, а условия матки не физиологичны для них. При естественном наступлении беременности зигота в 1 сутки находится в маточной трубе.
  • На 2 сутки уже можно предположить, какой из эмбрионов более качественный, некоторые останавливают свое развитие. Серьезные генетические отклонения еще не проявляют себя, поэтому подсадку не проводят.
  • На 3 сутки у эмбриона больше шансов прижиться. Но провести предимплантационную диагностику еще нельзя. При достаточном количестве оплодотворенный яйцеклеток чаще всего на этой стадии делают подсадку. Лишние эмбрионы можно криоконсервировать. Многим женщинам предлагают заморозить морулу на стадии mkv.
  • На 4 сутки – физиологичный срок, но невозможно посчитать количество клеток и оценить состояние эмбриона. Многие до стадии морулы не доживают.
  • 5 сутки – выживают наиболее качественные бластоцисты, частота имплантации на этой стадии доходит до 50%.

Оценка качества ооцитов и эмбрионов

Все пациенты интересуются качеством полученных  клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?».

Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения.

Выглядит это вот так:

В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.

После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.

Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI.

Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают.

Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого, ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.

При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.

Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.

Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.

  • Способны оплодотворятся только ооциты, находящиеся в стадии метафазы 2 процесса мейоза. Их обозначают как М2.

Зрелый ооцит выглядит так

  • Ооциты не достигшие зрелости имеют отличия от ооцита М2, которые эмбриолог способен увидеть только при выполнении оплодотворения методом ICSI. Незрелые ооциты имеют 2 вида: это клетка находящаяся в метафазе 1 мейоза (М1) и так называемый герминальный везикул (GV) ооциты в профазе I деления мейоза, определяемые по наличию зародышевого пузырька или ядерной оболочки в цитоплазме.

При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.

Оценка оплодотворения в стадии бластоцисты

Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.

Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.

На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением. 

Триплоидный эмбрион (3pn)

Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.

Плохое качество яйцеклеток при эко – причины

Среди причин, которые вызывают это принято выделять две группы: это эмбриональные причины и причины внешние. К эмбриональным причинам относят:

  • хромосомная патология плода. Почти половина всех естественных оплодотворений проходит незаметно для женщины, так как из-за быстрой гибели такого эмбриона задержки месячных может и не быть. При ЭКО эту причину можно исключить путем проведения предимплантационной диагностики с целью выявления хромосомной патологии эмбриона на стадии бластоцисты.
  • Эта методика проводится не всем парам, а только тем, которые ранее имели неудачные попытки экстракорпорального оплодотворения. В редких случаях бывает остановка развития эмбриона после проведения генетической диагностики, при том что эмбрионы считались хорошими.
  • При генетических внутриклеточных аномалиях

Сбой собственного генома во многих встречается на третьи сутки после оплодотворения в «пробирке», так как запасы ооцита иссекают, а морула самостоятельно не может их продуцировать по вышеописанным причинам, что в итоге ведет к гибели ее на 4е сутки. Если она пережила четвертые сутки, то это существенно увеличивает шансы на наступление беременности и поэтому лучше всего проводить подсадку на 5 день.

Среди причин со стороны внешних факторов принято выделять такие:

  • наличие в центре репродуктологии современного оборудования высококачественного класса в полном объеме
  • какие среды используют для культивации бластоцисты
  • соблюдение температурного режима в термокамере
  • постоянная работа сразу нескольких инкубаторов, что позволяет в экстренных ситуациях использовать их поочередно
  • высококвалифицированные работники в области репродуктологии и совместная работа всего коллектива, направленная на сохранение беременности и увеличение вероятности ее наступления.

Стадии развития эмбриона в эко до переноса по дням

Успех экстракорпорального оплодотворения зависит не только от состояния будущей мамы, но и от качества яйцеклеток. Стадии развития эмбриона в ЭКО до переноса контролируются по дням. Это позволяет заметить нарушения деления и отсеять некачественных зародышей.

День получения яйцеклеток считают нулевым, от него начинают дальнейший отсчет. Ооциты могут находиться в одной из трех стадий развития:

  • GV – это незрелые клетки с хорошо различимым ядром. Количество ДНК в них 4С, оно должно уменьшиться путем расформирования лишних хромосом в полярные тельца. В норме должно остаться 1С, чтобы слиться с таким же количеством генетического материала сперматозоида.
  • MI – незрелые ооциты. В них происходит растворение оболочки ядра, но количество ДНК еще не уменьшено. Первые две стадии оставляют для дозревания до третьей и проводят ИКСИ.
  • MII – зрелый ооцит. В нем находится 2С ДНК, но половина хромосом вытеснена в полярное тельце. От него яйцеклетка избавится после оплодотворения.

На этой стадии эмбриона используется среда G1, которая питает его до размера 8 клеток. Проникновение сперматозоида к ооциту через 4-7 часов приводит к вытеснению лишнего генетического материала, формируется зигота.

В клетке остается ДНК матери и отца, через несколько часов происходит формирование 2 пронуклеусов. иногда образуются аномальные формы с 1 или 3 и более пронуклеусами. Такие клетки отбраковывают.

Через 5-10 часов оболочки пронуклеусов растворяются, и появляется одна митотическая пластинка – выстроенное в ряд родительское ДНК. Через 3-4 часа начнется первое деление.

Стадии развития эмбриона при эко по дням: таблица

Для удобства определения стадии развития зародыша до подсадки, можно воспользоваться таблицей.

Сутки Название стадии Процессы в зародыше
0 Оплодотворение Слияние ооцита и сперматозоида
1 Зигота Дробление, образование бластомеров
2
3 Морула Компактизация
4 Кавитация
5 Бластоциста Продолжение кавитации, рост бластоцисты

Стадия бластомеров

На 2-4 сутки происходит дробление зиготы, образуются бластомеры. Сначала клетка делится пополам, затем каждая из полученных – снова пополам. Но деление происходит несинхронно, поэтому эмбриолог может заметить нечетное количество бластомеров.

В период дробления стадию определяют по числу клеток. Для оценки качества будущего эмбриона учитывают следующие показатели:

  • размер и форма;
  • количество ядер, в норме – в каждом бластомере по одному;
  • состояние цитоплазмы: вакуоли (vac), грануляция (gra), скопление органелл (serr), вредные вещества (rb) – плохие признаки;
  • процент фрагментации – количество безъядерных структур, в норме составляет не более 10%.

По итогам осмотра эмбриолог дает оценку и решает, какие зиготы перспективны в дальнейшем развитии.

Стадия компактизации эмбриона

На 3 сутки после оплодотворения начинается процесс компактизации. У бластомеров возникают отростки, которые помогают им плотно зацепиться за соседние клетки, установить контакт. Это происходит за счет специфических белков и ионов кальция.

Постепенно клетки распластываются, формируется цитоскелет. Если на этом этапе в среде будет недостаточно кальция, то зародыш раскомпактизуется. В противном случае образуется морула – это зародыш на стадии компактизации.

Эмбрион на стадии бластоцисты

За счет увеличения объема жидкости, начинает увеличиваться объем полости. Через какое время морула переходит в бластоцисту, определяется индивидуально. Процесс может длиться до 12 часов.

На этой стадии бластоцисте присваивают буквенно-числовое обозначение, характеризующее три паратметра:

  • цифра от 1 до 6 обозначает стадию развития;
  • буквы от А до С – качество внутриклеточной массы;
  • вторая буква А, В или С – состояние трофоэктодермы.

Например, эмбрион 4вв стадии – это зародыш среднего качества, который имеет шансы на имплантацию.

Оценка качества зародышей необходима, чтобы врач мог определиться со сроком подсадки, а при использовании витрифицированных эмбрионов – временем разморозки. В некоторых случаях необходима досрочная разморозка и доращивание зародышей.

Эмбрион на стадии кавитации

С конца 4- начала 5 суток морула переходит в стадию кавитации. Развитие эмбриона на стадии mcav предполагает появление полости, которая делит его на две части:

  • Трофобласт.
  • Внутренняя часть клеток.

Полость образуется за счет закачивания в нее жидкости. Это переходный момент, после которого можно сказать, что морула стала бластоцистой.

Эмбрион на стадии морулы

Постепенно морула теряет зависимость от кальция. Но ее качество оценить тяжело. На электронных снимках клетки выглядят сглаженными, их число определить практически невозможно.

На стадии морулы у хорошего зародыша имеется не менее 8 клеток. Она приобретает ровную сферическую форму, без различных выступов и впадин. Плохой прогноз – наличие вакуолей и фрагментация.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Анализы и лечение. Помощь людям
Adblock
detector